基于熒光定量PCR技術(shù)的松材線蟲快速檢測(cè)儀
發(fā)布時(shí)期:2025-12-03 10:16:49 作者: 農(nóng)業(yè)氣象站 來源:超聲波氣象站 人氣:29
松材線蟲快速檢測(cè)儀是應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)的專業(yè)設(shè)備,通過集成松材線蟲分離、DNA提取與熒光定量PCR檢測(cè)流程,實(shí)現(xiàn)對(duì)該有害生物的快速自動(dòng)檢測(cè)。儀器自動(dòng)分析并顯示結(jié)果、打印報(bào)告,無需人工判讀,用于林業(yè)檢疫與疫木排查。
松材線蟲快速檢測(cè)儀是一種基于分子檢測(cè)技術(shù)的實(shí)驗(yàn)室儀器,專門用于對(duì)松材線蟲進(jìn)行定性與定量分析。松材線蟲是引發(fā)松樹萎蔫病、導(dǎo)致松林大面積枯死的毀滅性病原生物。傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)鑒定方法耗時(shí)費(fèi)力且對(duì)專業(yè)人員依賴度高,該設(shè)備的出現(xiàn)旨在實(shí)現(xiàn)快速、準(zhǔn)確、標(biāo)準(zhǔn)化的檢測(cè),服務(wù)于林業(yè)檢疫、疫情監(jiān)測(cè)與疫木清理等環(huán)節(jié)。
該檢測(cè)儀的核心技術(shù)原理是熒光定量PCR。這是一種在PCR擴(kuò)增過程中,通過熒光信號(hào)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)靶標(biāo)DNA數(shù)量,從而對(duì)起始模板進(jìn)行定量的分子生物學(xué)技術(shù)。針對(duì)松材線蟲的特異性DNA序列設(shè)計(jì)引物與熒光探針,使得儀器能夠高特異性地識(shí)別出樣本中是否含有松材線蟲的遺傳物質(zhì),并能估算其相對(duì)含量。
一套完整的檢測(cè)流程主要包含三個(gè)自動(dòng)化或高度集成的步驟。第一步是松材線蟲的分離與樣本制備。操作人員將疑似感病的松木木屑或鉆取的木芯樣本放入設(shè)備配套的均質(zhì)或離心裝置中。部分集成化高的系統(tǒng)能自動(dòng)完成樣本的破碎與線蟲的初步富集,為下一步提取提供預(yù)處理樣本。
第二步是DNA的提取與純化。預(yù)處理后的樣本被轉(zhuǎn)移至核酸提取模塊。該模塊通常采用磁珠法或離心柱法等自動(dòng)化方法,通過裂解、結(jié)合、洗滌、洗脫一系列程序,自動(dòng)從復(fù)雜樣本中提取出高純度的總DNA,其中包括可能存在的松材線蟲DNA。這一步去除了抑制后續(xù)PCR反應(yīng)的雜質(zhì),是關(guān)鍵的前處理環(huán)節(jié)。
第三步是熒光定量PCR檢測(cè)與結(jié)果分析。純化后的DNA溶液被自動(dòng)或手動(dòng)加入含有特異性引物、探針及反應(yīng)體系的檢測(cè)卡盒或微孔板中,并置入儀器的溫控檢測(cè)艙。設(shè)備按照預(yù)設(shè)程序進(jìn)行升溫、降溫循環(huán),驅(qū)動(dòng)DNA的擴(kuò)增,并實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)每個(gè)循環(huán)后的熒光強(qiáng)度。全部過程結(jié)束后,儀器內(nèi)部的軟件會(huì)根據(jù)熒光曲線和設(shè)定的閾值,自動(dòng)判定樣本的陰陽性,并可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算初始模板的拷貝數(shù)。結(jié)果直接在觸摸屏上顯示,并可連接打印機(jī)輸出標(biāo)準(zhǔn)格式的檢測(cè)報(bào)告。
該設(shè)備的主要特點(diǎn)是高效、便捷與結(jié)果客觀。它將原本需要在多個(gè)實(shí)驗(yàn)室儀器間轉(zhuǎn)移、由不同專業(yè)人員操作的多步流程整合或串聯(lián)起來,大幅縮短了檢測(cè)時(shí)間,可在數(shù)小時(shí)內(nèi)完成從樣本到報(bào)告的全過程?!翱焖佟斌w現(xiàn)在流程的集成化與自動(dòng)化上。其“無需人工判讀”的特點(diǎn)尤為重要,儀器依據(jù)算法和設(shè)定閾值進(jìn)行客觀判斷,消除了不同人員因經(jīng)驗(yàn)差異導(dǎo)致的判讀誤差,保證了檢測(cè)結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)化與可重復(fù)性。
在實(shí)際應(yīng)用中,松材線蟲快速檢測(cè)儀主要用于兩個(gè)方面。一是用于森林病蟲害普查與疫情監(jiān)測(cè),對(duì)野外采集的大量樣本進(jìn)行快速篩查,及時(shí)掌握疫情分布與擴(kuò)散動(dòng)態(tài)。二是用于木材流通環(huán)節(jié)的檢疫,對(duì)調(diào)入調(diào)出的松木及其制品進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)或?qū)嶒?yàn)室快速查驗(yàn),防止疫情通過人為運(yùn)輸傳播。它為林業(yè)部門制定防控策略、劃定疫區(qū)、評(píng)估除治效果提供了直接的技術(shù)依據(jù)和數(shù)據(jù)支撐。
綜上所述,松材線蟲快速檢測(cè)儀是分子檢測(cè)技術(shù)在林業(yè)有害生物防控領(lǐng)域的具體應(yīng)用裝備。它通過將樣本處理、核酸擴(kuò)增與結(jié)果分析自動(dòng)化集成,實(shí)現(xiàn)了對(duì)松材線蟲的快速、特異、客觀檢測(cè),提升了林業(yè)檢疫工作的科技水平與響應(yīng)速度,是保護(hù)森林資源的重要技術(shù)工具。
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